Protein Expression and Characterization of Mungbean Starch Branching Enzyme Cdna in Different Host System (I)

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簡歷

基本資料

Project title

Code/計畫編號

NSC95-2313-B019-023-MY2

Translated Name/計畫中文名

綠豆澱粉分支脢DNA在不同宿主系統的表現與特性分析(I)

Project Coordinator/計畫主持人

Yuan-Tih Ko

Funding Organization/主管機關

National Science and Technology Council

Department/Unit

Department of Food Science

Website

https://www.grb.gov.tw/search/planDetail?id=1286833

Year

2006

Start date/計畫起

01-08-2006

Expected Completion/計畫迄

31-07-2007

Bugetid/研究經費

996千元

ResearchField/研究領域

食品科技(農)

澱粉分支.(starch branching enzyme, SBE, EC 2.4.1.18) 是澱粉生合成路徑的酵素之一，作用為水解澱粉基質上一段的α-1,4 鍵結並轉成α-1,6 鍵結，對支鏈澱粉 (amylopectin)的合成扮演重要的角色，而綠豆澱粉的結構分支多且鏈長，推測是綠豆分支.的功能特殊使然，本計劃除了進行綠豆分支.的基礎學術研究外，預期開發綠豆分支.成為食品工業用酵素的潛力，為導向性基礎研究。本研究先前已經成功的完成由成長中之台南五號綠豆(Vigna radiata cv. Tainan no.5) 選殖出兩種SBE 異構.(SBEII 與 SBEI) 的cDNA 全長，分別為2571 bp 及2208 bp，命名為VrsbeII 及VrsbeI，並已在 GenBank 註冊(accession no. AY622199 與AY667492 )，兩者包含起始到終止密碼子的完整ORF，並分別轉譯出856 個與735 個胺基酸，預估約97 kDa 及84 kDa 分子大小蛋白質，由樹狀演化分析得知這兩種SBE 異構型分別屬於不同的演化族群(FamilyA 及 B)，並與多數已知的SBE 有差距，值得進一步探究該酵素功能上的特殊性。因此，本計劃期望在連續期間，先進行全長野生型酵素探討，將分別放入不同的表現載體系統中進行蛋白質表現的測試，包括原核生物E. coli 與真核生物酵母菌Saccharomyces cerevisiae 與Pichia pastoris，將表現出的蛋白質含量作評比並進行SBE 活性分析比較與 Mass 鑑定;再將此兩條cDNA 以截短、嵌合等的突變型放在最佳表現系統進行探討，同時將進行大量製備與層析純化，純化的酵素將製備抗體當作分析工具，進行.的生化特性與結構-功能相關性分析的基礎研究，將評估兩種異構.的基質偏好性，作分別的探討;進一步得以利用基因工程改變催化特性，開發成為食品工業用酵素，作為生物性修飾澱粉結構的分子工具，取代化學性修飾，將全球環保的安全概念實質化，俾使澱粉的應用更趨多元化。

Keyword(s)

綠豆
澱粉分支.
cDNA
蛋白質表現
生物性修飾

DSpace CRIS

Protein Expression and Characterization of Mungbean Starch Branching Enzyme Cdna in Different Host System (I)

基本資料

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