Functional Regulation of the Immune Cell by Antitumor Factor of Hard Clam

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Details

Project title

Code/計畫編號

NSC89-2313-B019-042

Translated Name/計畫中文名

文蛤抗腫瘤特異性因子對免疫細胞的調節作用

Project Coordinator/計畫主持人

Zwe-Ling Kong

Funding Organization/主管機關

National Science and Technology Council

Department/Unit

Department of Food Science

Website

https://www.grb.gov.tw/search/planDetail?id=499790

Year

2000

Start date/計畫起

01-08-1999

Expected Completion/計畫迄

01-07-2000

Bugetid/研究經費

721千元

ResearchField/研究領域

基礎醫學

先前研究證實將市售生鮮文蛤 (Meretrix lusoria) 100℃3 0分萃取液，經30-50% 硫酸銨分劃後所得萃取物 (WG30-50) 對人類融合瘤細胞株HB4C5具有促進增生能力，但對人類肝癌細胞株HuH-6KK及 Hep G2則有致死的作用。本研究進一步將WG30-50 經 Phenyl-TOYOPEARL、Hydroxyapatite、 FPLC Superdex 75及 Mono Q等管柱層析分劃後，發現文蛤萃取物促進HB4C5細胞增生及抑制肝癌細胞生長的成份分別屬於不同分劃。經由螢光染色及DNA片段化分析發現，Superdex 75分離所得第二波峰 (S75II) 會以時間及劑量依存性效果誘導人類肝癌細胞 (HuH-6KK)、人類大腸結腸癌細胞 (HT2 9、 SK-CO-1、 COLO-201)、乳癌細胞 (MCF-7)、子宮頸癌細胞 (HeLa)、巨噬細胞 (U937、J774.1、CCRF-CEM)、老鼠黑色腫瘤細胞 (B16) 等細胞凋亡，但對Hep 3B及 HL-60無致死作用。將 HuH-6KK及 HT-29 細胞分別以 a-mannosidase-2抑制劑 swainsonine (5、2 mg/ml) 處理一週後，再添加 S75II測試，低濃度S75II對 HuH-6KK致死作用消失，但當S75II濃度高於25 mg/ml 時仍具有活性；但對於HT-29致死作用則完全消失。鈣離子螯合劑EGTA及抗氧化物 N-acetyl-L-cysteine不能抑制S75II之活性，排除了細胞外鈣離子及細胞內活性氧的參與。處理PKC抑制劑staurosporine及 PKC 活化劑TPA的結果顯示，S75II會抑制PKC 活性而造成HT-29細胞毒性。添加鋅離子 (200、100 mM) 前培養HuH-6KK及 HT-29 細胞 2 4 小時並不能完全抑制文蛤萃取物造成細胞凋亡現象。經由 actinomycin-D及 cycloheximide抑制測試發現此細胞凋亡過程不須新生RNA或蛋白質參與，推測S75II會活化原來已存在於細胞內的死亡機制。經由 caspase-3活性測試及添加caspase抑制劑zVAD-fmk的結果發現，S75II以時間及劑量依存性活化caspase-3，並經由DNA片段化證實S75II會透過caspase-3而誘導HuH-6KK 及 HT-29細胞凋亡，顯示文蛤萃取物誘導癌細胞凋亡的過程會透過活化細胞內caspase 家族。雖然粒線體內膜穩定劑Cyclosporine A 不能抑制S75II之細胞毒性，但不能就此排除粒線體可能參與其中。綜合實驗結果我們推測文蛤萃取物中之抗腫瘤成份極可能為凝集素樣分子，透過與細胞膜上受器之間的交互作用而活化細胞內caspase造成細胞凋亡。

Keyword(s)

文蛤
抗腫瘤活性
細胞程式化死亡
端粒酶
免疫細胞
Meretrix lusoria
Antitumor activity
Apoptosis
Telomerase
Immune cell

DSpace CRIS

Functional Regulation of the Immune Cell by Antitumor Factor of Hard Clam

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