The Studies on Separation, Purification, and Cloning and Production of Agarases from A. salmonicida MAEF108 and P. vesicularis MA103 and the Health Biological Characteristics of Algal Oligosaccharides from Individual Agarase Digested Algal

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Information

Details

Project title

Code/計畫編號

NSC94-2313-B019-023

Translated Name/計畫中文名

A. salmonicida MAEF108 與 P. vesicularis MA103所產洋菜脢分離純化、定序和選殖生產與個別洋菜脢水解海藻寡醣保健生理特性之探討

Project Coordinator/計畫主持人

Chorng-Liang Pan

Funding Organization/主管機關

National Science and Technology Council

Department/Unit

Department of Food Science

Website

https://www.grb.gov.tw/search/planDetail?id=1097170

Year

2005

Start date/計畫起

01-08-2005

Expected Completion/計畫迄

01-07-2006

Bugetid/研究經費

943千元

ResearchField/研究領域

食品科技(農)

Description

Abstract

" 第一年的工作為將本實驗室現有之 A. salmonicida MAEF108或 P. vesicularis MA103 分別於最佳培養基與培養條件下生產 agarase，接著經濃縮、透析、與層析後，以獲得個別純化之 agarase。個別純化之 agarase 分別測定生化特性，並以已純化agarase 分解市售 agarose，分析其水解產物做為判斷個別純化 agarase 為 α-agarase 或 β-agarase 之分解作用模式。接著對已純化 agarase 進行胺基酸定序，做為後續高利用價值 agarase 基因選殖之進行基礎。第二年的工作為將第ㄧ年已個別純化 agarase 分別用以分解紅藻 (紫菜)、褐藻 (馬尾藻)、及綠藻 (海菜) 溶液後，分別測定其抗氧化、抗致突變性、抗病毒性、抗凝血性、與微生物之抑菌性。並進一步分析海藻多酚含量、含硫酸酯寡醣含量、及(或) 寡醣之單糖組成個數與生理活性之相關性，並擬找出 2-3 種含海藻多酚或含硫酸酯之具開發應用價值海藻寡醣。從生理活性實驗結果，挑選 2-3 個具有開發潛力及應用價值 agarase，依照文獻中及上年度胺基酸定序結果，設計引子，以將 agarase 基因選殖出。第三年的工作為將第二年有開發潛力及應用價值 agarase 基因經基因選殖，並轉殖於 E. coil 後，然後表現純化，分析其個別生化特性，並與轉殖前agarase 之生化特性進行比較。然後將可能影響酵素水解機制有關的胺基酸序列，進行設計 site-directed mutagenesis 所需的引子，然後經選殖表現後，分析其核.酸序列，並分析其所具生化特性，以找出可在不同 pH 值、溫度下，仍具 agarase 活性的轉殖株，最後分解海藻多醣，分析海藻寡糖生理活性，驗證經蛋白質工程後之agarase 仍具原來之生理活性。 "

Keyword(s)

洋菜
純化
選殖
海藻寡醣
保健生理特性