Protein Expression and Characterization of Mungbean Starch Branching Enzyme cDNA in Different Host System

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簡歷

基本資料

Project title

Code/計畫編號

NSC94-2313-B019-021

Translated Name/計畫中文名

綠豆澱粉分支脢cDNA在不同宿主系統的表現與特性分析

Project Coordinator/計畫主持人

Yuan-Tih Ko

Funding Organization/主管機關

National Science and Technology Council

Department/Unit

Department of Food Science

Website

https://www.grb.gov.tw/search/planDetail?id=1097164

Year

2005

Start date/計畫起

01-08-2005

Expected Completion/計畫迄

31-07-2006

Bugetid/研究經費

977千元

ResearchField/研究領域

食品科技(農)

本計畫探討澱粉分支.(starch branching enzyme, SBE, EC 2.4.1.18)，它是澱粉生合成路徑的酵素之一，作用為水解α-1,4 直鏈並接成α-1,6 鍵結，對支鏈澱粉(amylopectin) 的合成扮演重要的角色，而綠豆澱粉的結構分支多而鏈長，因此懷疑可能是綠豆分支. 的功能特殊使然，本計畫方向除了進行綠豆分支.的基礎學術研究外，預期開發綠豆分支.成為食品工業用酵素的潛力。本研究先前NSC91 計畫支助已經成功的完成由成長中之台南五號綠豆(Vigna radiata cv. Tainan no.5)選殖出兩種SBE 異構.(SBEII 與SBEI) 的cDNA 全長，分別為2571 bp 及2208 bp，命名為VrsbeII 及VrsbeI，並已在GenBank 註冊(accession no. AY622199 與AY667492 )，兩者包含起始到終止密碼子的完整ORF，並分別轉譯出856 個與735 個胺基酸，預估約97 kDa 及84 kDa 分子大小蛋白質，由樹狀演化分析得知這兩種SBE 異構型分別屬於不同的演化族群(FamilyA 及B)，並與多數穀類的SBE 有差距，值得進一步探究該酵素功能上的特殊性。因此，本計畫預期兩年，第一年先將此兩條cDNA 以全長(full length)或設計以截短(truncated)或崁合 (chimeric)方式分別放入不同的表現載體系統中進行蛋白質表現的測試，包括原核生物 E. coli 與真核生物酵母菌Saccharomyces cerevisiae 與Pichia pastoris，將表現出的蛋白質含量作評比並進行SBE 活性分析比較與Mass 鑑定。接著，第二年進行大量製備與層析純化，純化的酵素將製備抗體作免疫分析使用，同時進行.的生化特性如適當pH, 適當溫度, 安定性等的基礎研究，將得以評估兩種異構.的基質偏好性，作分別的探討，本計畫的完成將可以進一步利用基因工程改變催化特性，將綠豆SBE 作為生物性修飾澱粉結構的分子工具，並開發成為食品工業用酵素，取代化學性修飾，俾使澱粉的加工與應用達到兼顧全球環保的概念與趨多元化的目的。

Keyword(s)

綠豆
澱粉分支.
cDNA
蛋白質表現
生物性修飾

DSpace CRIS

Protein Expression and Characterization of Mungbean Starch Branching Enzyme cDNA in Different Host System

基本資料

Description