E2F1 Regulates Nuclear Factor-kB Expression in Macrophages: Potential Inflammatory Activity of the Transcription Factor E2F1

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簡歷

基本資料

Project title

Code/計畫編號

NSC95-2311-B019-004

Translated Name/計畫中文名

巨噬細胞中E2F1調控NF-kB表現：E2F1轉錄因子可能的發炎活性

Project Coordinator/計畫主持人

Shye-Jye Tang

Funding Organization/主管機關

National Science and Technology Council

Department/Unit

Department of Bioscience and Biotechnology

Website

https://www.grb.gov.tw/search/planDetail?id=1296124

Year

2006

Start date/計畫起

01-08-2006

Expected Completion/計畫迄

01-07-2007

Bugetid/研究經費

1170千元

ResearchField/研究領域

生物科學

" 巨噬細胞在內毒素脂多醣LPS（lipopolysaccharide）和細胞激素所引起的發炎反應，扮有重要的角色。被活化的巨噬細胞將分泌細胞激素與自由基如一氧化氮進行致病因子的去除。但同時發炎反應也可能造成慢性或急性之疾病，如敗血症、自體免疫疾病、腦退化和糖尿病等，皆與不正常的發炎反應有關。 E2F 家族是一群轉錄因子，他們被認為參予細胞的生長調控。當 Cyclin-dependent kinases (CDKs)磷酸化RB 後，可釋放且活化E2F，參予細胞週期的調控和程式性死亡。在我們先前研究中顯示，CDK chemical inhibitors，olomoucine 和roscovitine，可經抑制CDK 活性而影響細胞活性。當巨噬細胞受到LPS，會產生各種發炎調節因子，誘發一系列的發炎反應，其中一氧化氮(NO)大量的表現會造成細胞死亡。在本研究中，LPS 處理RAW264.7 macrophage cells，模擬發炎反應，探討 olomoucine 及 roscovitine 可能會調節巨噬細胞發炎的調節因子釋放程度及相關調控基因的影響。實驗中我們發現，olomoucine 和roscovitine 抑制 LPS 所誘發之pro-inflammatory cytokines 基因表現和 iNOS mRNA 表現、蛋白質表現、NO 釋放。同時可抑制 iNOS 起動子和NF-kB 之活化。利用E2F1 interference RNA (E2F1i)抑制E2F1 之表現後，可同時抑制iNOS 起動子和NF-kB 活化。再經測定olomoucine 處理後之細胞，可發現olomoucine 可抑制NF-kB 之表現。因此，CDK 抑制劑可能經由抑制NF-kB 表現後，抑制LPS 產生的發炎反應。 CDK 抑制劑可經由防止CDK 磷酸化Rb，而抑制E2F1 之活化。因此，降低LPS 所產生的發炎反應，可能經由抑制E2F1 之活性所造成。在這計畫中將探討以下主題： 1. 使用E2F1 knock-down 巨噬細胞研究LPS 產生之發炎反應為測定E2F1 在發炎反應中扮演的角色，使用E2F1i 製備E2F1 knock-out 細胞。並測定LPS 在這細胞中產生的發炎反應如iNOS, IL-1, IL-6, IL-10, IL-12 and TNF-α 等基因的表現。並以iNOS 起動子和NF-kB reporter 分析NF-kB 活性變化。 2. E2F1 調控NF-kB p65 表現之研究使用生物資訊分析，顯示NF-kB 上具有E2F 之結合位置。使用NF-kB 起動子和serial deletion 或定位突變技術，與E2F1i 進行co-transfection，用以測定E2F1 之可能結合區域。並以chromatin immunoprecipitation 測定 E2F1 在NF-kB 起動子的結合活性。 3. E2F1 缺陷老鼠的發炎反應之變化利用E2F1 缺陷老鼠的巨噬細胞，分析這細胞經LPS 引起的發炎反應。探討 E2F1 缺陷，是否降低老鼠的發炎反應。 "

DSpace CRIS

E2F1 Regulates Nuclear Factor-kB Expression in Macrophages: Potential Inflammatory Activity of the Transcription Factor E2F1

基本資料

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