Development of the New Systems for Quick Screening the Anti-Viral Drugs and Vaccine of Dengue Virus and Enterovirus 71

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Details

Project title

Code/計畫編號

NSC100-2627-B019-001

Translated Name/計畫中文名

開發抗登革病毒與腸病毒71型的藥物及疫苗之快速篩選平台-抗登革病毒及腸病毒71型的藥物及疫苗之研發(總計畫及子計畫一)( III )

Project Coordinator/計畫主持人

Chang-Jer Wu

Funding Organization/主管機關

National Science and Technology Council

Department/Unit

Department of Food Science

Website

https://www.grb.gov.tw/search/planDetail?id=2359566

Year

2011

Start date/計畫起

01-08-2011

Expected Completion/計畫迄

31-07-2012

Bugetid/研究經費

1700千元

ResearchField/研究領域

基礎醫學
藥學
公共衛生學
生物技術(醫)

腸病毒七十一型 (EV71) 為一新型的腸病毒，會引發孩童造成病態致死，到目前為止，仍然沒有藥物或疫苗可以有效對抗腸病毒所引起的感染，因此急需從日常生活中尋找可有效對抗腸病毒感染之活性成分。登革病毒為黃質病毒屬中藉由蚊媒傳播而感染人類的病毒，估計每年登革出血熱或登革休克症後群的病例數約一百萬例左右，其中死亡病例數占2 - 5%。目前仍無針對登革相關疾病之疫苗和抗病毒藥物上市。研究發現從藻類所萃得的硫酸多醣 (sulfated polysaccharides) 其具有多重的生理功效，包括：抗病毒、抗腫瘤、抗凝血、免疫調節、免疫調節等功效。在本計畫中，將評估石蓴 (Ulva lactuca) 多醣萃取物 (U1, U2, U3) 和鹿角菜膠(carrageenan) 是否可以有效對抗腸病毒所引起的感染。在病毒吸附階段前，綠猿猴腎臟母細胞 (vero cell) 處理U1, U2, U3和carrageenan的組別，其可有效提高30%的細胞存活率和降低病毒感染所引起之細胞病變現象。在病毒吸附階段後，只有添加1 mg/ml的carrageenan才可有效提高細胞存活率。在病毒斑分析試驗，於相同濃度下，carrageenan的病毒斑抑制率 (90%) 高於添加石蓴多醣萃取物 (60%)。利用定量聚合?連鎖反應，在病毒吸附階段前或病毒吸附階段中，添加海藻多醣萃取物-U1, U2, U3和carrageenan可有效抑制病毒RNA的複製。利用免疫螢光染色的方式，顯示出海藻多醣萃取物的添加可有效降低胞內病毒抗原的表現量。在海藻抗登革病毒方面主要評估經熱水萃取之小球藻多醣萃取物 (Chlorella pyrenoidosa extracts, CPE) 及鹿角菜膠 (carrageenan) 對於第二型登革病毒 (Dengue virus Type II, DV2) 感染是否具抑制效果。細胞實驗方面，CPE 及 carrageenan 可干擾病毒感染之早期階段。CPE 及 carrageenan 直接與病毒顆粒作用 (virucide)、作用於病毒感染前 (pre-treatment) 或作用於病毒進入細胞階段 (post-treatment)，1 mg/ml 濃度可降低病毒感染能力、胞內病毒核醣核酸量及胞內病毒抗原量，其中又以 virucide 之效果最佳。DV2 之 C3H/HeN 乳鼠感染模式中，八日齡小鼠經顱內注射 100 PFU/mouse 之病毒感染劑量，死亡率為 100%，並有部分感染小鼠出現腸胃道出血、血漿滲漏的登革症狀。CPE 及 carrageenan 於DV2 攻毒前混合，可提高感染小鼠之存活率。細胞培養微陣列晶片檢測系統，可即時時動態量測病毒感染後細胞耗氧率之定量量測、以及病毒抑制藥物對病毒的抑制性之初步量測上。此創作便於檢測研發新興藥物或疫苗，了解細胞毒化後每個階段的代謝情況，進而達到藥物快速篩選、疾病檢測、與疫苗開發之目的。微懸臂樑感測系統可免除傳統免疫分析之繁瑣與費時，亦無須藉由複雜之動物實驗驗證。此外，亦對抗病毒藥物-藻類萃取物進行篩選，成功達成快速檢測病毒感染歷程。

Keyword(s)

登革病毒
腸病毒71型
海藻多醣萃取物
細胞培養微陣列晶片
微懸臂樑感測器
藥物篩選

DSpace CRIS

Development of the New Systems for Quick Screening the Anti-Viral Drugs and Vaccine of Dengue Virus and Enterovirus 71

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