Characterization of Surface Antigens of Aeromonas hydrophila and Establishment of an Enzyme Immunoassay (II)

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簡歷

基本資料

Project title

Code/計畫編號

NSC89-2313-B019-074

Translated Name/計畫中文名

食品病原菌Aeromonas hydrophila表面抗原之探討及其酵素免疫分析法建立(II)

Project Coordinator/計畫主持人

Guo-Jane Tsai

Funding Organization/主管機關

National Science and Technology Council

Department/Unit

Department of Food Science

Website

https://www.grb.gov.tw/search/planDetail?id=553403

Year

2000

Start date/計畫起

01-08-2000

Expected Completion/計畫迄

01-07-2001

Bugetid/研究經費

700千元

ResearchField/研究領域

食品科技(農)

水生產氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)為食品病原菌，廣泛存於多種食品中，由初步研究顯示由食品分離株8-169抗體建立的免疫分析法無法偵測所有臨床分離株，且與Aeromonas sobria、Aeromonas caviae、Escherichia coli、Vibrio cholerae、Plesiomonas shigelloids有交叉反應。本研究乃欲探討不同來源之A. hydrophila分離株表面抗原之差異，同時探討A. hydrophila與上述各菌間表面抗原之差異，以期得到A. hydrophila特有之表面抗原，供生產抗體之用，以建立酵素結合免疫分析法(ELISA)，將之應用於牛乳、牡蠣及絞豬肉中對此菌之分析。分別選取A. hydrophila病人分離株YM2和YM3，食品分離株8-169和溝渠分離株CCRC 13880以及非A. hydrophila菌株A. sobria、A. caviae、E. coli、V. cholerae、P. shigelloids共9株菌，以10/sup 7/cfu/mL菌量免疫白兔。以此抗體分別和菌株之外膜蛋白、S-layer蛋白、PBS以及含Teepol之PBS萃取液進行免疫轉漬分析，顯示食品分離株8-169之主要結合蛋白分子大小為48、42、29、23 kD，13880菌株則為44、29、27 kD，臨床分離株YM2和YM3則以79和44 kD結合蛋白為主，由不同表面抗原萃取方法之比較，顯示A. hydrophila菌體表面結構因菌株來源不同而異。以此9株菌之外膜蛋白和所得之9種抗體進行交叉反應，顯示8-169抗體可以偵測出其他環境分離株，且不會和A. sobria有交叉反應，YM3抗體可偵測出其他臨床分離株，亦不會和A. sobria有交叉反應。選擇8-169菌株之48、42 kD外膜蛋白，以及YM3 44 kD之外膜蛋白及其PBS萃取液，以100μg/mL之蛋白量免疫白兔，得到相對抗體，以此抗體利用Horseradish peroxidase建立三明治式ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)，比較各抗體專一性，以8-169 PBS萃取液所得之抗體(Ab-A)專一性最佳，對A. hydrophila檢出率為94%(47/50)。在包括A. sobria及A. caviae在內之10株非A. hydrophila菌株中，其僅對E. coli有弱偽陽性反應。將此ELISA應用在食品上，顯示牛乳、牡蠣與絞豬肉之成分並不明顯干擾ELISA分析。牛乳人為接種此菌置於28℃及4℃培養，此菌皆可生長達10/sup 7/ CFU/ml，但市售鮮乳並無此菌之污染，無論是人為接種或天然市售牡蠣及絞豬肉於28℃及4℃培養時，此菌菌數均達10/sup 7/ CFU/ml以上。不論是人為添加或是自然污染狀況，ELISA均可偵測牛乳、牡蠣及絞豬肉中此菌之含量，且分析數值與平板菌落法相近。絞豬肉中可能含有非因受熱而死亡的菌體，造成ELISA所得數值稍高於平板菌落法。

Keyword(s)

水生產氣單胞菌
表面抗原
酵素免疫分析
食品檢驗
Aeromonas hydrophila
Surface antigen
Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)
Food inspection

DSpace CRIS

Characterization of Surface Antigens of Aeromonas hydrophila and Establishment of an Enzyme Immunoassay (II)

基本資料

Description