The Production of an Antiserum against DNA Polymerase .alpha. and Its Application to the Measurement of Phytoplankton Growth Rate in situ

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簡歷

基本資料

Project title

Code/計畫編號

NSC84-2611-B019-002

Translated Name/計畫中文名

製造能辨識核酸聚合脢之抗體來研究浮游植物在自然界的生長率

Project Coordinator/計畫主持人

Jeng Chang

Funding Organization/主管機關

National Science and Technology Council

Department/Unit

Institute of Marine Biology

Website

https://www.grb.gov.tw/search/planDetail?id=162275

Year

1995

Start date/計畫起

01-08-1994

Expected Completion/計畫迄

01-07-1995

Bugetid/研究經費

399千元

ResearchField/研究領域

海洋科學

這篇論文是以聚合？連鎖反應(PCR)的技術,找出浮游藻類DNA聚合？.alpha.的片段基因,定出其序列,且評估DNA聚合？.alpha. mRNA之表現與生長率的關係,以為往後用DNA聚合？.alpha.來當做浮游植物細胞週期中S期的指標蛋白質,打下基礎。在實驗期間,為了建立在微細藻類中進行PCR的標準條件,先選用Rubisco (Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase)的基因,做為PCR測試的材料。其次,針對人類及酵母菌的DNA聚合？.alpha.序列設計了退化引子(Degenerate primer),並對取自指數期(Exponential phase)的矽藻(Skeletonema costatum)RNA進行PCR反應。反應結束後取PCR反應後產物跑2%洋菜膠電泳,可得明顯單一產物。將此單一產物拿去轉殖,定出核酸序列並轉譯出胺基酸序列,經過基因庫(Gene bank)比較得知其胺基酸序列和其他物種之DNA聚合？.alpha.的胺基酸序列都極為相似。此外,同一套退化引子亦可在Tetraselmis chuii及Anabaena sp.中增殖DNA聚合？.alpha.的基因片段,證實此一基因廣泛的存在屬於不同分類群的微細藻類之中。本實驗同時分離出培養基中的海水細菌,另外並以抗生素處理矽藻培養液,經抽取兩者的RNA做PCR反應,再將此PCR產物用已經序列比對的基因片段為探針進行南方氏點墨雜合(Southern blot hybridization)。結果發現只有經抗生素處理過的矽藻PCR產物才會與探針行雜交反應,而細菌之PCR產物則否,這些證據均支持所得到的DNA聚合？.alpha.的片段基因的確來自藻類。實驗最後的階段在測試DNA聚合？.alpha.的mRNA與生長率的關係。結果發現DNA聚合？.alpha.的mRNA大量出現的時期為生長曲線中指數期(Exponential phase)及平穩期(Stationary phase)。

DSpace CRIS

The Production of an Antiserum against DNA Polymerase .alpha. and Its Application to the Measurement of Phytoplankton Growth Rate in situ

基本資料

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