Analysis of DNA Mismatch Recognition Proteins in Chlorella pyrenoidosa by a MSH6-Dependent Competitive Binding Assay

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Project title

Code/計畫編號

NSC93-2311-B019-001

Translated Name/計畫中文名

以MSH6競爭性吸附法分析小球藻DNA配對錯誤辨識蛋白

Project Coordinator/計畫主持人

Todd Hsu

Funding Organization/主管機關

National Science and Technology Council

Department/Unit

Department of Bioscience and Biotechnology

Website

https://www.grb.gov.tw/search/planDetail?id=1003015

Year

2004

Start date/計畫起

01-08-2004

Expected Completion/計畫迄

01-07-2005

Bugetid/研究經費

989千元

ResearchField/研究領域

生物科學

" DNA 錯誤配對修補系統辨識並修補起因於DNA 高重覆序列複製時聚合酵素滑動、化學傷害或自發性鹼基變異,而辨識蛋白與單純鹼基錯誤配對或核酸環之結合為啟動切割修補作用之關鍵步驟。本實驗室已自成熟斑馬魚中選殖到DNA 錯誤配對蛋白MSH6 之全長cDNA,並以親和性吸附法證實經體外轉錄/轉譯作用產生之重組MSH6 對G-T 錯誤配對結合能力為正常雙股DNA 之4 倍。因DNA 錯誤配對修補系統於植物中之運作方式仍未明確,本計畫將以小球單胞藻 Chlorella pyrenoidosa 為一植物模式系統探討並分析其錯誤配對辨識蛋白。本計畫實驗執行方式為(1)以RT-PCR 取得與哺乳類動物有57%相似度之斑馬魚MSH6 cDNA,然後以體外轉錄/轉譯作用產生帶放射性之重組蛋白, 而將小球藻蛋白質抽取液先經陰離子交換樹酯管柱初步純化後再藉競爭性親和性吸附法探討何種藻蛋白可競爭斑馬魚MSH6 對帶有G-T 錯誤配對寡核甘酸之結合作用,待藻類辨識蛋白確認候以蛋白質質譜法研究其屬性。 (2)以固定化之G-T 錯誤配對寡核甘酸直接與小球藻蛋白質抽取液反應並以固定化之正常雙股核甘酸為控制組,接著以二維蛋白質電泳分離吸附後之藻蛋白,待以影像分析系統確認辨識蛋白後利用蛋白質質譜法研究其屬性。本計畫預期可發現植物之DNA 錯誤配對辨識蛋白並瞭解其特性。 "

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Analysis of DNA Mismatch Recognition Proteins in Chlorella pyrenoidosa by a MSH6-Dependent Competitive Binding Assay

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