GBSS Activities on Mungbean (Vigna radiata L.) Starch Granule and Analysis of Its Total Protein Profiles

Abstract

不同澱粉含量的成熟綠豆品種KPS1 (D7,53.5%)、KPS2 (D11,49.5%)、VC6173B-6 (D27,46.4%) 與含有澱粉佔乾重46.3％的台南五號綠豆(D35)樣品，分別製備生澱粉後，分析其表面存在與經由澱粉酶處理後離心回收的總水解液(total lysate)所釋放的澱粉顆粒結合性澱粉合成酵素 (GBSS; granule bound starch synthase) 活性，並與經過SDS加熱萃取的澱粉顆粒比較所得的澱粉顆粒結合性蛋白質(GBPs; granule bound proteins) 圖譜。結果顯示生澱粉表面之GBSS的比活性，以D7的13.2U/g為最高，又以D27的9.5U/g為最低；相對的，水解液之GBSS的比活性在D7為15.8 U/mL，其次為D11之4.35 U/mL，次之為D35的3.9 U/mL，最後為D27的1.9 U/mL，顯示澱粉含量最高的D7，其澱粉表面與總水解液的GBSS活性都最高，而澱粉含量低的D27，其GBSS活性也最低。當總水解液以離心分為上清液與沉澱時，離心時間會影響活性分佈，D7水解上清液的GBSS總活性佔總水解液的19.4%，而D35水解上清液只佔約7%，顯示D7澱粉表面較容易被澱粉酶水解釋放出GBSS。其次，先添加澱粉酶於反應液當中再超音波振盪可以提高澱粉酶對生澱粉的作用。各品種綠豆的生澱粉經過70℃與95℃的SDS溶液加熱萃取的GBPs，主要蛋白質種類沒有顯著差異性，但由澱粉酶水解所釋放出的GBPs種類中，卻不包含分子量為100-、22-、15-、10-kDa的蛋白質，顯示此四種蛋白質是存在於澱粉顆粒的內層。